關(guān)于微生物鏡檢的原理!
原生動(dòng)物與細(xì)菌之間存在相互依存的功能關(guān)系;原生動(dòng)物個(gè)體大,便于觀(guān)察;對(duì)于環(huán)境變化比細(xì)菌敏感,更早更容易反映環(huán)境的變化。微生物鏡檢中對(duì)原生動(dòng)物的種類(lèi)組成、數(shù)量、生長(zhǎng)和變化狀況的觀(guān)察,也能反映出細(xì)菌的生長(zhǎng)和變化情況,即間接地評(píng)價(jià)污水處理過(guò)程和處理效果的好壞,起指導(dǎo)生產(chǎn)的作用。
一、鏡檢微生物的分類(lèi)
1、形態(tài)
原生動(dòng)物門(mén)屬真核原生生物界,是單細(xì)胞的微型動(dòng)物,由原生質(zhì)和一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核組成。原生動(dòng)物和多細(xì)胞動(dòng)物相同,具有新陳代謝、運(yùn)動(dòng)、繁殖、對(duì)外界刺激的感應(yīng)性和對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性等生理功能。原生動(dòng)物個(gè)體很小,長(zhǎng)度一般在100~300μm之間。它們都具有細(xì)胞膜。多數(shù)種屬的細(xì)胞膜結(jié)實(shí)而富有彈性,從而使原生動(dòng)物本體保持一定的體形。但也有一些種屬,例如變形蟲(chóng),只有一層極薄的原生質(zhì)膜,不能保持固定的體形。原生動(dòng)物一般具有一個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞核,其形狀多種多樣,它們?cè)谄浼?xì)胞內(nèi)產(chǎn)生形態(tài)的分化,形成了能夠執(zhí)行各項(xiàng)生命活動(dòng)和生理功能的胞器。在運(yùn)動(dòng)胞器方面有鞭毛、偽足和纖毛;在營(yíng)養(yǎng)胞器方面有胞口、胞咽和食物泡;用以排出廢料和調(diào)節(jié)滲透壓的胞器有伸縮泡等。有些種類(lèi)的原生動(dòng)物的細(xì)胞膜內(nèi)分布著肌絲,具有收縮變形的功能。
2、營(yíng)養(yǎng)方式
原生動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)方式分為以下幾類(lèi):①動(dòng)物性營(yíng)養(yǎng),以吞食細(xì)菌、真菌、藻類(lèi)或有機(jī)顆粒為生,絕大多數(shù)原生動(dòng)物為動(dòng)物性營(yíng)養(yǎng),有些具有胞口、胞咽等攝食器;②植物性營(yíng)養(yǎng),在有陽(yáng)光的條件下,一些含色素的原生動(dòng)物可利用二氧化碳和水進(jìn)行光合作用合成碳水化合物,如植物性鞭毛蟲(chóng),但種類(lèi)和數(shù)量都很少;③腐生性營(yíng)養(yǎng),以死的機(jī)體或無(wú)生命的可溶性有機(jī)物質(zhì)為生;④寄生性營(yíng)養(yǎng),以其它生物的機(jī)體(即寄主)作為生存的場(chǎng)所,并獲得營(yíng)養(yǎng)和能量。
3、分類(lèi)
1981年國(guó)際原生動(dòng)物學(xué)會(huì)公布了原生動(dòng)物分類(lèi)系統(tǒng),其中在水處理中常見(jiàn)的有三類(lèi):
①肉足類(lèi),其細(xì)胞質(zhì)可伸縮變動(dòng)而形成偽足,作為運(yùn)動(dòng)和攝食的胞器,運(yùn)動(dòng)速度達(dá)3μm/s,典型的肉足類(lèi)為變形蟲(chóng)屬、簡(jiǎn)便蟲(chóng)屬、表殼蟲(chóng)屬和鱗殼蟲(chóng)屬等;
②鞭毛類(lèi),具有一根或一根以上的鞭毛。鞭毛長(zhǎng)度與其體長(zhǎng)大致相等或更長(zhǎng)些,是運(yùn)動(dòng)器官,鞭毛蟲(chóng)又可分為植物性鞭毛蟲(chóng)和動(dòng)物性鞭毛蟲(chóng),常見(jiàn)的植物性鞭毛蟲(chóng)有滴蟲(chóng)屬、屋滴蟲(chóng)屬和眼蟲(chóng)屬等,常見(jiàn)的動(dòng)物性鞭毛蟲(chóng)有波豆蟲(chóng)屬、尾波蟲(chóng)屬等,鞭毛蟲(chóng)的運(yùn)行速度達(dá)15~300μm/s;
③纖毛類(lèi),原生動(dòng)物周身表面或部分表面具有纖毛,作為行動(dòng)或攝食的工具,具有胞口、口圍、口前庭和胞咽等司吞食和消化的細(xì)胞器官,分為游泳型和固著型兩種,游泳型包括漫游蟲(chóng)屬、草履蟲(chóng)屬、腎形蟲(chóng)屬、斜管蟲(chóng)屬等,固著型常見(jiàn)的有鐘蟲(chóng)屬、累枝蟲(chóng)屬、蓋蟲(chóng)屬、聚縮蟲(chóng)屬、盾纖蟲(chóng)屬和殼吸管蟲(chóng)屬等,纖毛類(lèi)運(yùn)動(dòng)速度較快,可達(dá)200~1000μm/s。
二、鏡檢微生物與細(xì)菌的關(guān)系
1、活性污泥的基本特征
活性污泥是污水活性污泥處理系統(tǒng)的反應(yīng)工作主體,是由細(xì)菌、微型動(dòng)物為主的微生物與懸浮物質(zhì)、膠體物質(zhì)混雜在一起所形成的絮狀體顆粒。良好的活性污泥具有很強(qiáng)的吸附分解有機(jī)物的能力和良好的沉降性能,絮體的大小約為0.02~0.2mm,多為茶褐色,微具土壤味,密度約為1.005g/cm3,含水率99%左右?;钚晕勰嘀猩嬷鞣N微生物,構(gòu)成了復(fù)雜的微生物相。在多數(shù)情況下,活性污泥中的主要微生物是細(xì)菌,伴之以營(yíng)腐生的原生動(dòng)物構(gòu)成基本營(yíng)養(yǎng)層次,然后是以細(xì)菌為食的掠食性原生動(dòng)物占優(yōu)勢(shì)。同時(shí)可以查看中國(guó)污水處理工程網(wǎng)更多技術(shù)文檔。
2、原生動(dòng)物與細(xì)菌的功能關(guān)系
在廢水生物處理系統(tǒng)中將污染物質(zhì)降解的主要是細(xì)菌。原生動(dòng)物與細(xì)菌的關(guān)系主要為:
①掠食關(guān)系,原生動(dòng)物在食物鏈中處于捕食細(xì)菌的作用。一方面,原生動(dòng)物通過(guò)對(duì)細(xì)菌的捕食,能促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng),使細(xì)菌的生長(zhǎng)能維持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,防止種群的衰老,提高細(xì)菌的活力,而且原生動(dòng)物活動(dòng)產(chǎn)生溶解性有機(jī)物質(zhì)(DOM)可被細(xì)菌再利用,促進(jìn)了細(xì)菌的生長(zhǎng);另一方面,原生動(dòng)物中存在的某些類(lèi)型(如纖毛類(lèi))具有吞食游離細(xì)菌的巨大能力,而游離的細(xì)菌個(gè)體小、密度小,較難沉淀,易被出水帶出而影響水質(zhì)。有人證明奇觀(guān)獨(dú)縮蟲(chóng)在自然水體中1h能吃3萬(wàn)個(gè)細(xì)菌。Curds等人在曝氣池中接種纖毛類(lèi)原生動(dòng)物,出水大為改善。
②絮凝作用,細(xì)菌生長(zhǎng)到一定程度后就凝集成絮狀物。這種絮狀物為原生動(dòng)物提供了著生的環(huán)境,反過(guò)來(lái)絮狀物上的原生動(dòng)物能加速絮凝過(guò)程。Curds等證明纖毛蟲(chóng)能分泌兩種物質(zhì),一種稱(chēng)為P物質(zhì),是一種多糖類(lèi)碳水化合物;另一種是屬于單糖結(jié)構(gòu)的葡萄糖及阿拉伯糖,表面電荷為負(fù)的懸浮顆粒會(huì)吸收這種P物質(zhì),通過(guò)懸浮顆粒表面電荷的改變,就使懸浮顆粒集結(jié)起來(lái),形成絮狀物。另外,纖毛蟲(chóng)還能分泌一種粘液,能把絮狀物再聯(lián)結(jié)起來(lái)。原生動(dòng)物分泌的粘液對(duì)懸浮顆粒和細(xì)菌均有吸附能力。這就促進(jìn)了菌膠團(tuán)的形成和處理能力的提高。
三、鏡檢的目的
要了解污水處理過(guò)程的變化或處理水的好壞,最好直接研究分析細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。但是對(duì)于細(xì)菌的觀(guān)察、分類(lèi)鑒定的時(shí)間很長(zhǎng),不能及時(shí)起指導(dǎo)生產(chǎn)的指示和預(yù)報(bào)作用。原生動(dòng)物與細(xì)菌之間存在相互依存的功能關(guān)系;原生動(dòng)物個(gè)體大,便于觀(guān)察;對(duì)于環(huán)境變化比細(xì)菌敏感,更早更容易反映環(huán)境的變化。直接觀(guān)察原生動(dòng)物的種類(lèi)組成、數(shù)量、生長(zhǎng)和變化狀況,也能反映出細(xì)菌的生長(zhǎng)和變化情況,即間接地評(píng)價(jià)污水處理過(guò)程和處理效果的好壞,起指導(dǎo)生產(chǎn)的作用。
四、鏡檢分析方法
1、形態(tài)和生理觀(guān)察
采用顯微鏡對(duì)污水處理過(guò)程中的活性污泥生長(zhǎng)、變化進(jìn)行觀(guān)察。特別是觀(guān)察原生動(dòng)物的形態(tài)和生理特征。顯微鏡的放大倍數(shù)采用16×10或16×40即可,觀(guān)察到的原生動(dòng)物應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖進(jìn)行對(duì)照。建議可以采用《淡水微型生物圖譜》上的圖片進(jìn)行比較。通過(guò)原生動(dòng)物的形態(tài)來(lái)確認(rèn)其種類(lèi)和特性,進(jìn)而來(lái)分析其所處的生理狀態(tài)或生理階段,這能間接反映活性污泥的特性。
2、數(shù)量分析
建議采用以下簡(jiǎn)單易行的方法:用1mL移液管,移取1mL清水到表面皿中。用一橡膠頭小吸管,從表面皿中將1mL水全部吸盡,然后以均勻的速度徐徐滴下,記錄1mL水的滴數(shù),并重復(fù)數(shù)次,以免誤差。用橡膠頭小吸管在反應(yīng)器中取得均勻的混合液,滴一滴于載玻片上,蓋上蓋玻片,用低倍顯微鏡由左到右或由上到下(注意應(yīng)采用相同的方向順序)進(jìn)行原生動(dòng)物的計(jì)數(shù)。應(yīng)把蓋玻片下所有原生動(dòng)物記錄,并重復(fù)數(shù)次。用一滴混合液中原生動(dòng)物的記錄數(shù)乘以計(jì)數(shù)吸管1mL水的滴數(shù),即為每mL活性污泥混合液的原生動(dòng)物數(shù)。
五、微生物的指示作用
1、指示活性污泥性質(zhì)
1)污泥惡化
活性污泥絮凝體較小,往往在0.1~0.2mm以下。主要出現(xiàn)以下優(yōu)勢(shì)原生動(dòng)物:豆形蟲(chóng)屬、腎形蟲(chóng)屬、草履蟲(chóng)屬、瞬目蟲(chóng)屬、波豆蟲(chóng)屬、尾滴蟲(chóng)屬、滴蟲(chóng)屬等。這些都屬于快速游泳型的種屬。污泥嚴(yán)重惡化時(shí),微型動(dòng)物幾乎不出現(xiàn),細(xì)菌大量分散,活性污泥的凝聚、沉降能力下降,處理能力差。
2)污泥解體
絮凝體細(xì)小,有些似針狀分散。主要的優(yōu)勢(shì)原生動(dòng)物有:變形蟲(chóng)屬、簡(jiǎn)便蟲(chóng)屬等肉足類(lèi)。
3)污泥膨脹
活性污泥沉降性能差,SVI值高。由于絲狀菌的大量生長(zhǎng),出現(xiàn)能攝食絲狀菌的裸口目旋毛科、全毛類(lèi)原生動(dòng)物及擬輪毛蟲(chóng)等。
4)污泥從惡化恢復(fù)到正常
通過(guò)反應(yīng)參數(shù)和環(huán)境的改變,活性污泥從惡化狀態(tài)恢復(fù)到正常的過(guò)渡期常常有下列原生動(dòng)物出現(xiàn):漫游蟲(chóng)屬、斜葉蟲(chóng)屬、管葉蟲(chóng)屬等,這些都屬于慢速游泳或匍匐行進(jìn)的生物。
5)污泥良好
易成絮體,活性高,沉降性能好。出現(xiàn)的優(yōu)勢(shì)原生動(dòng)物為:鐘蟲(chóng)屬、累枝蟲(chóng)屬、蓋蟲(chóng)屬、有肋盾纖蟲(chóng)屬、獨(dú)縮蟲(chóng)屬、各種吸管蟲(chóng)類(lèi)、輪蟲(chóng)類(lèi)、寡毛類(lèi)等這些均屬于固著性種屬或者匍匐性種屬。
2、指示反應(yīng)操作環(huán)境
1)優(yōu)勢(shì)種屬
Modoni在1988年對(duì)污水處理廠(chǎng)進(jìn)行這方面的研究,總結(jié)出:高負(fù)荷、曝氣量相對(duì)不足時(shí),小鞭毛蟲(chóng)占優(yōu)勢(shì);過(guò)短的水力停留時(shí)間,造成小的游泳型纖毛蟲(chóng)占優(yōu)勢(shì);非常高的負(fù)荷或存在難降解的物質(zhì)時(shí),出現(xiàn)小的裸變形蟲(chóng)和鞭毛蟲(chóng);大量出現(xiàn)匍匐性和固著性纖毛蟲(chóng)或有殼變形蟲(chóng)時(shí),表明運(yùn)行環(huán)境良好,處理效果好。另外有研究證明,溶解氧不足易出現(xiàn)阿托氏菌屬、扭頭蟲(chóng)屬和新態(tài)蟲(chóng)屬等;而過(guò)分曝氣則出現(xiàn)肉足類(lèi)及輪蟲(chóng)類(lèi);有機(jī)負(fù)荷很低,出現(xiàn)硝化作用時(shí),能觀(guān)察到游仆蟲(chóng)屬、旋口蟲(chóng)屬、表殼蟲(chóng)屬、鱗殼蟲(chóng)屬及輪蟲(chóng)等;在除氮污水廠(chǎng),低負(fù)荷,長(zhǎng)水力停留時(shí)間及高溶解氧的場(chǎng)合,有殼變形蟲(chóng)是最好的指示生物。
2)形態(tài)變化
在一定條件下,原生動(dòng)物能分泌膠質(zhì)并形成膜將蟲(chóng)體包圍起來(lái),形成孢囊。大多數(shù)孢囊用以保護(hù)蟲(chóng)體免受不利的環(huán)境因素(如溫度不適,pH值變化,食料短缺等)的影響。待環(huán)境轉(zhuǎn)好時(shí),蟲(chóng)體能恢復(fù)活力,脫孢而出。同樣,鞭毛蟲(chóng)的鞭毛在條件不利時(shí),鞭毛消失,條件適宜時(shí),又重新生出。當(dāng)曝氣池中溶解氧降低到1mg/L以下時(shí),鐘蟲(chóng)生活不正常,體內(nèi)伸縮泡會(huì)脹得很大,頂端突進(jìn)一個(gè)氣泡,蟲(chóng)體很快會(huì)死亡;當(dāng)pH值突然發(fā)生變化超過(guò)正常范圍,鐘蟲(chóng)表現(xiàn)為不活躍,纖毛環(huán)停止擺動(dòng),蟲(chóng)體收縮成團(tuán)。所以雖然觀(guān)察到鐘蟲(chóng)數(shù)量較大,但蟲(chóng)體萎靡或變形時(shí),則反映出細(xì)菌的活力在衰退,污水處理效果有變差的趨勢(shì)。
3)生殖方式
原生動(dòng)物的生殖方式有無(wú)性生殖和有性生殖。無(wú)性生殖即簡(jiǎn)單的細(xì)胞分裂,細(xì)胞核和原生質(zhì)一分為二。在營(yíng)養(yǎng)、溫度、氧等環(huán)境條件良好的場(chǎng)合,原生動(dòng)物就進(jìn)行連續(xù)的無(wú)性生殖。當(dāng)出現(xiàn)有性生殖(接合生殖)時(shí),往往預(yù)示環(huán)境條件變差或種群已處于衰老期。
3、估計(jì)有機(jī)負(fù)荷
有機(jī)負(fù)荷的變化會(huì)導(dǎo)致原生動(dòng)物的結(jié)構(gòu)和數(shù)量變化,尤其是纖毛蟲(chóng)屬。通過(guò)觀(guān)察微生物的組成和數(shù)量,就能預(yù)測(cè)污水廠(chǎng)運(yùn)行的有機(jī)負(fù)荷。
4、預(yù)測(cè)出水水質(zhì)
通過(guò)對(duì)活性污泥曝氣池中的原生動(dòng)物的調(diào)查,發(fā)現(xiàn)雖然原生動(dòng)物對(duì)環(huán)境適應(yīng)的范圍較寬,但最合適、數(shù)量最多的是集中在一個(gè)狹小的范圍。根據(jù)這一特征,將出水BOD分為4個(gè)等級(jí):0~10mg/L,11~20mg/L,21~30mg/L,>30mg/L。在生產(chǎn)運(yùn)行過(guò)程時(shí),只要觀(guān)察原生動(dòng)物的構(gòu)成情況,即可以預(yù)測(cè)出水BOD了。實(shí)踐證明,有柄纖毛蟲(chóng)的數(shù)量和質(zhì)量是預(yù)測(cè)出水水質(zhì)最重要的原生動(dòng)物。
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